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測(cè)定氨基酸的方法!!!

返回列表 來(lái)源:未知 發(fā)布日期:2021-09-06 09:17【

    氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)大分子的基礎(chǔ)物質(zhì)。氨基酸分析在生 物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、化工等領(lǐng)域有重要作用。目前高效液相色 譜法為分析氨基酸的重要方法;但是許多氨基酸無(wú)紫外吸收, 需要經(jīng)過(guò)衍生化之后才可以測(cè)定。常用的衍生化試劑有:水合 茚三酮、鄰苯二甲醛、異硫氰酸苯酯(PITC)、2,4- 二硝基氟 苯(DNFB)等。高 速 冷 凍 離 心 機(jī)(CL31R, 美 國(guó) Thermo 公 司), 超 聲 波 清 洗 器(SK5200LHC,53KHz/35KHz,上海科導(dǎo)儀器有限公司),pH 計(jì)(PB-10,賽 多麗絲中國(guó)儀器公司),恒溫電熱水浴鍋(HH.SY11-NI2B, 北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司),恒溫干燥箱(KXH 202-2A,上 海科析實(shí)驗(yàn)儀器廠),電子分析天平(感量:0.0001g,稱量: 110g,美國(guó) OHAUS Corp 公司),4℃ /-20℃冰箱(BCD-216KDA, 海爾集團(tuán)),渦旋混合器(XW-80A,江蘇海門(mén)市其林貝爾儀 器制造有限公司)。

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    堿性氨基酸:His 在流動(dòng)相 pH=5.0 至 pH=6.5 時(shí),峰型相 差不大,保留時(shí)間基本一致;Ccp 在流動(dòng)相 pH 為 6.5 時(shí)峰型較 好,分離度較好;Arg 在流動(dòng)相 pH=6.0 至 pH=7.0 時(shí),峰面積 積分相差不大,峰型較好,分離度較好,雖然在流動(dòng)相 pH 為 5.5 時(shí)峰面積積分最大,但是在流動(dòng)相 pH=5.0 時(shí),Arg 測(cè)不到氨基 酸峰。酸性氨基酸:Asp 的最佳柱溫為 32℃;Gly 最佳柱溫為 40℃。中性氨基酸:Glu 的最佳柱溫為 30℃,GABA 最佳柱溫 為 32℃。堿性氨基酸:His 最佳柱溫為 35℃,Ccp 最佳柱溫為 32℃,Arg 最佳柱溫為 32℃。